微生物實(shí)驗(yàn)室常見消毒滅菌方法

微生物實(shí)驗(yàn)室常用的器材一般包括玻璃器材、金屬器械、橡膠制品及塑料制品等，每類器材的處理及消毒措施都有不同。嚴(yán)格的消毒滅菌工作極為重要，直接影響著整個實(shí)驗(yàn)?zāi)芊耥樌M(jìn)行。

常見消毒滅菌方法

目前，常用的消毒滅菌方法多采用物理方法(如，干熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線消毒法等)和化學(xué)方法(消毒劑、抗生素)兩大類。

1.干熱滅菌法

是利用恒溫干燥箱內(nèi)120℃～170℃的高熱，并保持90～120分鐘，殺死細(xì)菌和芽孢，達(dá)到滅菌目的的一種方法。主要適用于不便在壓力蒸汽滅菌器中進(jìn)行滅菌，且不易被高溫?fù)p壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此方法滅菌的物品干燥，易于貯存。酒精燈火焰燒灼滅菌法也是屬于干熱滅菌的方法之一，在進(jìn)行動物細(xì)胞體外培養(yǎng)工作時，常須利用工作臺面上的酒精燈火焰對金屬器具及玻璃器皿口緣進(jìn)行補(bǔ)充滅菌。

2.濕熱滅菌法

壓力蒸汽濕熱滅菌法是目前常用的一種滅菌方法。它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環(huán)境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而使微生物死亡。適合于布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和某些培養(yǎng)液的滅菌。高壓蒸汽滅菌器的蒸汽壓力一般調(diào)整為1.0～1.1 kg/cm2，維持20～30min即可達(dá)到滅菌效果。

3.射線消毒法

利用紫外線燈進(jìn)行照射消毒的方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的作用機(jī)制是通過對微生物的核酸及蛋白質(zhì)等的破壞作用而使其滅活。適合于實(shí)驗(yàn)室空氣、地面、操作臺面消毒。消毒時間為30min。用紫外線殺菌時應(yīng)注意，不能邊照射邊進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，因?yàn)樽贤饩€不僅對人體皮膚有傷害，而且對培養(yǎng)物及一些試劑等也會產(chǎn)生不良影響。

4.過濾除菌法
是將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾，使大于濾膜孔徑的細(xì)菌等微生物顆粒阻留，從而達(dá)到除菌的方法。過濾除菌法大多用于遇熱易發(fā)生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養(yǎng)液等。

目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾除菌，或用玻璃細(xì)菌濾器、濾球負(fù)壓過濾除菌。濾膜孔徑應(yīng)在0.22～0.45μm范圍內(nèi)或用更小的細(xì)菌濾膜，溶液通過濾膜后，細(xì)菌和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻，并利用濾膜的吸附作用，阻制小于濾膜孔徑的細(xì)菌透過。

5.化學(xué)消毒劑消毒法
用于那些不能利用物理方法進(jìn)行滅菌的物品、空氣、工作面、操作者皮膚、某些實(shí)驗(yàn)器皿等。常用的化學(xué)消毒劑包括甲醛、高錳酸鉀、70%～75%乙醇、過氧乙酸、來蘇爾水、0.1%新潔爾滅、環(huán)氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%～75%乙醇、0.1%～0.2%HgCl?、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)材料的滅菌;利用甲醛加高錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加熱熏蒸法進(jìn)行無菌室和培養(yǎng)室的消毒。在使用時應(yīng)注意安全，特別是用在皮膚或?qū)嶒?yàn)材料上的消毒劑，須選用合適的藥劑種類、濃度和處理時間，才能達(dá)到安全和滅菌的目的。

6.抗生素抑菌法
主要用于培養(yǎng)液，是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段以及作為微生物污染不嚴(yán)重時的“急救”措施。常用的抗生素有青霉素、鏈霉素和新霉素等。